聯(lián)系我們
聯(lián)系人：
總經(jīng)理 13917267438 （趙）（同微信）
閔經(jīng)理 13818341261
任經(jīng)理 13085076120
李經(jīng)理 15801723647
聯(lián)系電話：021-54172191
傳真號碼：021-54132629
QQ：2025986469
Email：2025986469@qq.com
公司地址： 上海市閔行區(qū)金平路328弄124號1002室
郵政編號：200240
公司網(wǎng)址：www.cnbsfin.com
文章詳情
場景恐懼實(shí)驗(yàn)
日期：2025-05-03 08:06
瀏覽次數(shù)：1994
摘要：
場景恐懼實(shí)驗(yàn)
場景恐懼實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（FCS）用于小型嚙齒類動物（大、小鼠）環(huán)境相關(guān)條件性恐懼實(shí)驗(yàn)研究。嚙齒類動物在恐懼時會表現(xiàn)出特有的不動狀態(tài)（immobility），動物在這種情況下傾向于保持靜止不動的防御姿勢。抗抑郁藥和抗**興奮藥可以明顯縮短不動狀態(tài)持續(xù)的時間。實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)對象被給與一個聲音信號（條件刺激），隨后給予電擊（非條件）刺激。該訓(xùn)練稱為條件性訓(xùn)練，訓(xùn)練結(jié)束后實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行聲音信號或環(huán)境聯(lián)系性實(shí)驗(yàn)。一般情況下嚙齒類動物對相應(yīng)的環(huán)境和不同環(huán)境下同樣的聲音信號都會做出明顯的條件性恐懼反應(yīng)，如靜止不動。這種測試可以在訓(xùn)練結(jié)束后立刻或幾天后進(jìn)行可以提供在條件信號影響下短期和長期記憶的信息。
場景恐懼實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（FCS）用于小型嚙齒類動物（大、小鼠）環(huán)境相關(guān)條件性恐懼實(shí)驗(yàn)研究。嚙齒類動物在恐懼時會表現(xiàn)出特有的不動狀態(tài)（immobility），動物在這種情況下傾向于保持靜止不動的防御姿勢。抗抑郁藥和抗**興奮藥可以明顯縮短不動狀態(tài)持續(xù)的時間。實(shí)驗(yàn)過程中，實(shí)驗(yàn)對象被給與一個聲音信號（條件刺激），隨后給予電擊（非條件）刺激。該訓(xùn)練稱為條件性訓(xùn)練，訓(xùn)練結(jié)束后實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行聲音信號或環(huán)境聯(lián)系性實(shí)驗(yàn)。一般情況下嚙齒類動物對相應(yīng)的環(huán)境和不同環(huán)境下同樣的聲音信號都會做出明顯的條件性恐懼反應(yīng)，如靜止不動。這種測試可以在訓(xùn)練結(jié)束后立刻或幾天后進(jìn)行可以提供在條件信號影響下短期和長期記憶的信息。
一、實(shí)驗(yàn)設(shè)備
1、硬件系統(tǒng)采用嵌入式單片機(jī)為主要控制核心，實(shí)驗(yàn)恒流、恒壓刺激
2、聲音延時、電壓及電流值采用軟件直接設(shè)置。
3、每個電極上都具有峰值可調(diào)的方波信號。
4、各電極都采用循環(huán)移位脈動刺激方式，使動物承受的電流為恒定值，與傳統(tǒng)的固定電極刺激相比，避免了因動物站立在相同電極上而不能刺激的缺點(diǎn)。
5、本系統(tǒng)中所有信號的傳輸都采用USB接口。
6、本刺激系統(tǒng)適合不同大小的動物
二、實(shí)驗(yàn)方法
分為訓(xùn)練和測試兩階段
（一）訓(xùn)練階段（**天）
1．調(diào)試儀器，以確保格柵地板有電流刺激，擴(kuò)音器有聲音刺激，并分別記錄電流強(qiáng)度和聲音強(qiáng)度（分貝）。
2．將大鼠放入條件恐懼箱2min（A相），記錄這*初2min內(nèi)動物的凝滯（freezing）時間作基線。
3．接著加入卡嗒聲，80Db,30s(B相)。
4．緊接著再給予電擊，0.35mA，2s（C相），完成一輪訓(xùn)練。如需要多輪訓(xùn)練，則重復(fù)A、B、C三相訓(xùn)練即可。
5．記錄整個訓(xùn)練階段動物凝滯時間（s），用以測量動物的非條件恐懼（unconditioned fear）。
6．將大鼠移開操作箱。用70%的酒精或4%醋酸溶液徹底清潔操作箱，以備進(jìn)行下一批動物的訓(xùn)練。
（二）測試階段 在訓(xùn)練后的**天進(jìn)行，包括關(guān)聯(lián)（context）測試、變更關(guān)聯(lián)（altered context）或條件刺激前（pre-conditioning-stimulus，pre-CS）測試以及條件刺激（conditioning stimulus，CS）測試。測試階段沒有電擊刺激。關(guān)聯(lián)測試和變更關(guān)聯(lián)測試中也沒有聽覺條件刺激，但每只動物所用的操作箱應(yīng)與訓(xùn)練階段的相同。
1．關(guān)聯(lián)測試 將動物放入箱內(nèi)，計算機(jī)自動記錄動物的凝滯行為。若用人工觀察，則觀察者（應(yīng)不知道動物的處理或基因型）用靜聲秒表通過箱門上的貓眼（小窗口）觀察動物的行為并計分：凝滯為1分，活動（moving）為0分（也有只記錄凝滯時間）。每10秒觀察一次，共5min，這樣可記錄到30次（bout）可能的凝滯（即*大凝滯得分為30分）。用在這一階段記錄到的、動物在同一操作箱內(nèi)的凝滯時間測量動物的關(guān)聯(lián)條件恐懼（contextually conditioned fear）。此為關(guān)聯(lián)測試。觀察結(jié)束后將動物放回籠內(nèi)，清潔操作箱，進(jìn)行下一只動物的觀察。
2．變更關(guān)聯(lián)測試和聽覺條件刺激測試 關(guān)聯(lián)測試1h后進(jìn)行。操作如下：
（1）將計算機(jī)調(diào)至所需程序。
（2）操作箱進(jìn)行如下改造：1用平滑塑料板取代關(guān)聯(lián)條件箱內(nèi)的格柵地板；2在箱的對角線加一塊有色塑料板，這樣將長方體的操作箱變成三角體；3改變嗅覺暗示（olfactory cues）。例如，可在箱的一角放一個裝有一滴桔子汁或檸檬汁的杯子，或直接將一滴果汁涂于墻上。然后開始變更關(guān)聯(lián)和聽覺條件刺激實(shí)驗(yàn)。
（3）將動物放入經(jīng)改造后的關(guān)聯(lián)箱（從關(guān)聯(lián)實(shí)驗(yàn)中的**只動物開始）。
（4）啟動預(yù)置的實(shí)驗(yàn)程序，每隔10秒記錄動物的凝滯和非凝滯得分（分別為1和0分），共記錄3min，即18次可能的凝滯記錄（凝滯得分為18）。
（5）加入聽覺條件刺激30秒。重復(fù)上述記錄3分鐘。
（6）將動物放回籠子，清潔操作箱，進(jìn)行下一只動物的測試。
三、結(jié)果計算與分析
因?yàn)椴煌愋偷膶W(xué)習(xí)凝滯時間不同，所以*常使用百分計：
關(guān)聯(lián)=（關(guān)聯(lián)測試中的凝滯得分/30）*100%
變更關(guān)聯(lián)（條件刺激前）=（變更關(guān)聯(lián)中的凝滯得分/18）*100%
聽覺暗示（條件刺激）=（聽覺條件刺激中凝滯得分/18）*100%
對每一不同的凝滯測試計分進(jìn)行重復(fù)測量單因素方差分析（ANOVA），從此比較關(guān)聯(lián)和變更關(guān)聯(lián)或聽覺暗示之間的條件恐懼程度，并確定組間差異。一般而言，動物在聽覺暗示中的凝滯行為要比關(guān)聯(lián)測試的多。在變更關(guān)聯(lián)測試中，由于關(guān)聯(lián)條件箱已被改造得“面目全非”，訓(xùn)練時動物獲得的對周圍環(huán)境的關(guān)聯(lián)幾乎不存在，因此，凝滯行為應(yīng)該*少。關(guān)聯(lián)與變更關(guān)聯(lián)差別很大，凝滯計分差別越大。
如果動物在**天的關(guān)聯(lián)測試和聽覺暗示測試中出現(xiàn)凝滯，而在變更關(guān)聯(lián)測試中不表現(xiàn)凝滯行為，則可認(rèn)定：動物的感覺和運(yùn)動功能均正常；能記住前**與厭惡刺激配對出現(xiàn)的暗示信號；能分辨前**不與厭惡刺激配對出現(xiàn)的暗示信號，說明動物具有正常的記憶。這些測試中的任何一項(xiàng)增強(qiáng)或減弱，提示調(diào)節(jié)記憶情感部分的神經(jīng)解剖、神經(jīng)遞質(zhì)和基因可能發(fā)生變化。
四、指標(biāo)參數(shù)
Freezing相關(guān)：實(shí)驗(yàn)時間、freezing總次數(shù)、每次freezing時間點(diǎn)、每次freezing持續(xù)時間、freezing總時間、freezing時間占總時間的百分比、
活動度相關(guān)：總實(shí)驗(yàn)時間、總距離（cm）、總平均速度（cm/s）、每個階段的時間、距離及平均速度
